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干血斑 (点) 技术应用于北京冬奥兴奋剂检测，优势在哪里？
2022 北京冬奥会
虎年大年初四 (2022 年 2 月 4 日)，在欢度新春佳节之际，我们也将迎来 2022 北京冬奥会。
本届冬奥会有众多精彩看点，身形矫健、奋勇拼搏的运动员，激动人心、动人心魄的雪上运动赛项，还有多项顶尖科技将集体亮相，创下历届冬奥会第一：第 1 个全 5G 覆盖的国际重大体育赛事；媒体转播全面上云；“冰丝带” (国家速滑馆) 是目前世界上最大的采用二氧化碳跨临界直冷制冰技术打造的多功能全冰面，碳排放趋近于零；DBS 正式成为冬奥会兴奋剂检测方法……
北京冬奥会兴奋剂检测新亮点：DBS
一直以来，为保证体育赛事的公平公正公开，兴奋剂检测已成为运动员们赛前必不可少的体检项目。
兴奋剂检测可采用尿检和血检。尿检的取样需要由专人陪同，涉及 “隐私性”；血检必须由具备医学资质的专业人士，严格使用取血器材来抽取血样，且抽血程序需要得到运动员的认可和签字确认，强调专业性和程序正确性。
自 2019 年某运动员在兴奋剂检测中砸碎血样瓶引发国际体坛重大风波后，WADA (世界反兴奋剂组织) 就计划引入一种新型的样本采集方式，力求解决运动员兴奋剂检测的取样问题，避免同类事件再次发生。同年 10 月，由 WADA 牵头发起，包括中国反兴奋剂中心在内的全球 7 大国家反兴奋剂中心和国际组织共同决定将大力推行 DBS 方法，目标在 2022 年北京冬季奥运会和残奥会上实现使用 DBS 作为常规方法进行兴奋剂检测。
DBS
DBS (Dried Blood Spot) 的中文是干血斑 / 干血点 (将指血滴在专用卡纸上，干燥后形成的斑点),可用于微量血液样本的储存、运输和分析检测。
与传统的血检相比，DBS 具有以下独特的优势：
采集方便，可由运动员自行独立完成。
微量采样，几滴指血即可。
固态血液样品安全、稳定，运输和储存方便。
DBS 在运动员兴奋剂检测中的应用，不仅适用于更大规模、更大覆盖面的检查，进而更有力地打击使用兴奋剂的违规者；还可以更好地保护运动员的隐私，提高运动员对于兴奋剂检测的依从性，尤其是在全球新冠病毒大流行的背景下，DBS 可以通过更少的人际接触展开兴奋剂的检查工作。
解决 DBS 分析 “痛点”
CAMAG 领跑反兴奋剂检测
随着 DBS 方法在兴奋剂检测中的大力推广应用，兴奋剂检测的频率和覆盖面将大幅增加。然而，在海量的样品面前，传统的 DBS 样品前处理方法已经不再适用，打孔-洗脱-超声-离心等多步骤，不仅费时耗力，而且难以质控，也成为 DBS 分析的最大瓶颈。
鉴于此，瑞士 CAMAG 公司依靠多年来在 DBS 样品处理领域积累的丰富经验和技术，推出新一代全自动干血斑样品处理系统：DBS-MS 500 HCT，可直接萃取 DBS 样品，无缝偶联液相色谱串联质谱 LC-MS/MS，实现样品全自动分析。
DBS-MS 500 HCT
DBS-MS 500 HCT 特性:
One-Click 全自动样品制备
2 分钟制备 1 个样品
可连续制备 2,000 个样品
适用于萃取痕量的内源性和外源性物质
与主流的 LC-MS 和样品收集器无缝串联
目前 DBS-MS 500 HCT 已成功应用于自行车运动员的兴奋剂检测。
一直以来，DBS 分析过程中斑点面积还原成全血体积的准确性是一个 “痛点” 问题。由于每个人的 HCT (血细胞比容) 不一样，转换因子会受到 HCT 的影响，因此，测量 HCT 就成为了一个突破口。
由于运动员在运动前后会有大量体液的流失，这会造成 HCT 发生剧烈的变化，从而降低其 DBS兴奋剂检测的准确性。新一代全自动干血斑样品处理系统 DBS-MS 500 HCT 装有 HCT 分析模块，通过分析每个 DBS 样品的 HCT 值，可以消除 HCT 对全血体积定量不准确性的影响，从而大幅提高分析的准确度，进而大幅提高运动员在 DBS 兴奋剂检测的准确性。
检测案例
曲马多 (Tramadol)，是一种阿片类药物，主要用作镇痛药，可缓解普通到严重的疼痛。由于其在竞技自行车运动中的滥用，2019 年国际自行车联盟已将其列为禁用药物。针对曲马多 (tramadol) 及其代谢物 O-去甲基曲马多 (O-desmethyltramadol)，CAMAG 开发了一种方法，能够实现 4 分钟从样品到结果的全自动分析 (图 1)。研究者对 26 个真实样品进行传统血检和 DBS 检测，并将两种方法进行了交叉验证。结果显示，借助 DBS-MS 500 HCT，DBS 检测和传统血检的结果一致性良好 (图 2)，证明了 DBS 兴奋剂检测的可行性。
DBS 兴奋剂检测，中国在行动
反兴奋剂是一项长期而艰决的工作，需要全球各国的共同合作与努力。中国反兴奋剂中心作为全球 DBS 项目的发起者之一，全方位参与项目的规则和方法研究。中国反兴奋剂中心主任陈志宇表示，在全面总结、汲取备战东京奥运会史上最严反兴奋剂工作成功经验基础上，中国反兴奋剂中心结合冬季项目备战的特点，制定了 “更严” 的北京冬奥会反兴奋剂工作方案和措施，以 “零容忍” 的态度全力实现北京冬奥会兴奋剂问题 “零出现” 目标。
反兴奋剂中心与国际同行合作开展的干血点检测项目将在 2022 年北京冬奥会和冬残奥会中执行。2021 年 6 月，反兴奋剂中心发布 《反兴奋剂中心关于开展干血点兴奋剂检查的通知》，并正式启动 DBS 兴奋剂检查检测工作。截至 2021 年 10 月底，北京冬奥会备战兴奋剂检查总例数已突破 4000 例，到运动员进村，还将实施超过 2000 例检查。
参考文献：
1. 一起向未来！多项顶尖科技亮相北京冬奥会，光明网，2022 年 1 月 17 日.
2. WADA leads exciting collaboration on dried-blood-spot testing, WADA RELEASES, 03 OCT 2019.
3. Updates on Anti-doping and TUE Management in Paralympic Sport, International Paralympic Committee.
4. Luginbühl M, Angelova S, Gaugler S,Längin A, Weinmann W. Automated high-throughput analysis of tramadol and O-desmethyltramadol in dried blood spots. Drug Testing and Analysis. 2020.doi:10.1002/dta.2819.
5. Luginbühl M, Fischer Y, Gaugler S. Fully Automated Optical Hematocrit Measurement from Dried Blood Spots, Journal of Analytical Toxicology. 2020. doi:10.1093/jat/bkaa189.
6. Luginbühl M, Gaugler S. Dried blood spots for anti-doping: Why just going volumetric may not be sufficient. Drug Testing and Analysis. 2021; 13: 69–73. doi:10.1002/dta.2977.
7. 北京冬奥会将全面开展干血点兴奋剂检查，人民网，2021 年 6 月 16 日.
8. 实验室认可助力我国反兴奋剂工作走向标准化、规范化，中国质量报，2021 年 7 月 16 日.
9. 北京冬奥会反兴奋剂备战冲刺，新华网，2021 年 10 月 27 日.
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| 标签： | 干血斑, 干血点, 冬奥, 血检, 样品制备 |
