新型Bst DNA聚合酶上市，聚焦LAMP核酸扩增

2023-03-24 13:12:13, 赛默飞生命科学赛默飞世尔科技生命科学产品

环介导等温扩增（Loop-mediated Isothermal Amplification, LAMP）是 Notomi 等人于 2000 年提出的一种新型核酸扩增技术，可在恒温下（60–65℃）对DNA靶标进行快速、简单和特异性的扩增，已被广泛地应用于病原微生物检测和传染性疾病诊断等领域，具有广阔的应用前景。反转录环介导等温扩增（Reverse transcription loop-mediated isothermal amplification, RT-LAMP）结合了cDNA合成过程，可对病毒病原体的RNA靶标进行高效扩增。

LAMP扩增原理

LAMP扩增主要有两步，非循环步骤和自动循环步骤。第一步是内引物（FIP）的延伸，与靶标DNA结合开始互补链的合成。紧接着是外引物（F3）的链侵入延伸，释放单链DNA作为下游引物的模板。转换得到的内部序列在F端形成一个茎环结构。在另一端借助BIP引物和B3引物进行同样的过程，最终得到一个哑铃结构，两端各有一个茎环结构。这种结构含有多个扩增起始位点，通过自扩增加快了DNA的扩增，得到不同长度和菜花样结构的扩增DNA。

图1. 等温DNA扩增简化流程。所用引物（3对）：FIP/BIP, F3/B3和Loop F/B。“c” 代表互补序列（如F1c与F1序列互补）。

RT-LAMP的优势

RT-LAMP仅需少量的RNA作为模板，耐受抑制剂，操作简单且具有良好的特异性和灵敏度。在恒温条件下进行扩增使得反应无需PCR&qPCR仪器，由于无需等待温度变化，可提供更高的扩增效率。

无需配套昂贵的仪器（仅需加热模块）
流程简单，检测快速（15-60分钟）
对抑制剂更高的耐受能力
可使用多种方式（浊度法、比色法、测流法等）解读检测结果

图2. LAMP检测结果解读方法。

RT-LAMP的应用领域

基于LAMP技术的独特优势，从发明开始在一些应用领域内得到了迅速发展。RT-LAMP可用于实验室内对病原体（细菌、寄生虫和病毒）进行更为快速的检测。由于检测的简便性，其还非常适用于现场检测或床旁检测。由于RT-LAMP仅需简单设备但可提供高特异性的检测结果，且检测结果可即时读取，所以其也是应对流行病的理想检测方案。这意味着在诸如机场、学校等非标准检测场所也可进行检测。随着RT-LAMP技术的发展，其还可用于开发多重检测试剂、移动生物感应器和可携带的侧向流检测试剂。其还可应用于遗传疾病的早期检测。此外，为了增加RT-LAMP的灵敏度和特异性，可将RT-LAMP和CRISPR等技术结合，开启了一些新的应用机会。总的来说，RT-LAMP的优势给现场即时检测和诊断领域带来了新的发展机会。

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