它的甜度竟是蔗糖的几百倍，食品中用了多少？

甜度竟是蔗糖的几百倍，不敢想象，这得是怎么样一种甜法……

甜菊糖甙（俗称甜菊糖、甜菊糖苷）是一种从菊科草本植物甜叶菊（或称甜菊叶）中精提的新型天然甜味剂。国际甜味剂行业的资料显示，甜菊糖甙已在亚洲、北美、南美洲和欧盟各国广泛应用于食品、饮料、调味料的生产中。其甜味成分由甜菊苷及甜菊A苷、B苷、C苷、D苷和E苷组成。我们国家是全球最主要甜菊糖甙生产国。

甜菊糖甙甜度为蔗糖的250~450倍，带有轻微涩味，甜菊A苷带有明显的苦味及一定程度的涩味和薄荷醇味，味觉特性要比甜菊双糖苷A差些，适度可口，纯品后味较少，是最接近砂糖的天然甜味剂，甜菊糖苷甜度高，且持续时间长，无褐变，极利于保持饮料、食品的本色。

针对目前国内食品行业（例如饮料、糕点、糖果）中添加甜菊糖的情况，海能仪器推出了食品中甜菊糖苷的高效液相色谱测定方法。

实验部分

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基本原理

样品中甜菊糖苷经溶剂提取净化后，供高效液相色谱仪（紫外检测器）检测，外标法定量。

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试剂与材料

除另有说明外，所用试剂均为分析纯

乙腈（色谱纯）， 磷酸，石油醚

0.002 mol/L 磷酸溶液：精密称取0.196 g 磷酸于1000 mL 容量瓶中，加水定容至刻度。

甜菊糖苷（ Stevioside C38H60O18）标准品：含量>99.7 % CAS 57817-89-7。

甜菊糖苷标准溶液：精密称取甜菊糖苷标准品10 mg 于10 mL 容量瓶中，加1 ml 乙腈，溶解后加水定容至刻度，得甜菊糖苷浓度为1 mg/mL 的标准溶液。

甜菊糖苷标准系列溶液的制备：精密吸取甜菊糖苷标准溶液0.05 mL、0.1 mL、0.2 mL、0.5 mL、1.0mL 于10 mL 容量瓶中，加水稀释并定容至刻度，得浓度为5.0 μg/mL、10.0 μg/mL、20.0 μg/mL、50.0 μg/mL、100.0 μg/mL 的甜菊糖苷的系列标准溶液。取此系列标准溶液适量，使用0.22 nm 有机滤膜过滤后待测。

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仪器与设备

海能LC7000液相色谱仪：配紫外检测器

电子分析天平：感量1 mg

混匀器

离心机，转速大于5000 r/min

滤膜：0.22 μm 有机滤膜

LC7000四元低压梯度系统

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样品的制备

液体样品：

称取5.0 g 试料，于10 mL 烧杯中，精确至0.01 g，加流动相适量，混匀后，移入50mL 容量瓶中，加流动相定容至刻度。充分振荡混匀后，过0.22 μm 有机滤膜待测。

水溶性固体样品：

取有代表性的混合均匀试料2.5 g，于10 mL 烧杯中，精确至0.01 g，加流动相适量，混匀后，移入50 mL 容量瓶中，加流动相定容至刻度。充分振荡混匀后，过0.22 μm 有机滤膜待测。

水不溶性试料：

取有代表性的混合均匀试料2.5 g，于10 mL 烧杯中，精确至0.01 g，移入50 mL离心管中，加15 ml 石油醚涡旋振荡5min，在5000 r/min 下离心10 min，将上清液弃去，残渣中再加15 mL×3 石油醚，重复以上步骤3 次，弃去上清液，氮气吹干残渣。

残渣中加1 g 无水硫酸钠和8m0.22μm有机滤膜乙腈，涡旋振荡5 min，在5000 r/min 下离心10 min，上清液置于25 mL 比色管中，重复提取1次，氮气吹干后，残渣用流动相全量转移到50 mL 容量瓶中并定容至刻度。充分混匀后过0.22 μm有机滤膜待测。

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分析步骤

色谱条件

色谱柱：C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）

流动相：0.002 mol/L磷酸溶液+乙腈=70+30

流速：1.0 mL/min

柱温：30 ℃

波长：210 nm

进样量：10μL

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结果与分析

1.测定

精密吸取试料和标准品溶液，按规定色谱条件分别进样10 μL，以甜菊糖苷保留时间定性，外标法峰面积定量。标准色谱图见下图。

结果按下式计算：

式中：

X—试料中甜菊糖苷含量，mg/kg

C—从标准曲线中算出试液中甜菊糖苷的浓度，μg/mL

m—试料质量或体积，g 或ml

V—试料定容体积，m

2.重复性

如图：

图中可见，甜菊糖苷连续5针进样，峰面积重复性RSD%0.004，保留时间重复性良好，完全满足方法要求。

3.线性范围和检出限

本方法的线性范围为5.0 μg/mL～100.0 μg/mL。检出限为4.00 mg/kg。

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