小麦粉与大米粉及其制品中甲醛次硫酸氢钠含量的测定

本实验参考国家标准GB/T 21126-2007《小麦粉与大米粉及其制品中甲醛次硫酸氢钠含量的测定》，适用于小麦粉、大米粉及其制品中残留甲醛及甲醛次硫酸氢钠含量的测定。

1、方法原理    

在酸性溶液中，样品中残留的甲醛次硫酸氢钠分解释放出的甲醛被水提取，提取后的甲醛与2，4-二硝基苯肼发生加成反应，生成黄色的2，4-二硝基苯腙，用正已烷萃取后，经高效液相色谱仪分离，与标准甲醛衍生物的保留时间对照定性，用标准曲线法定量。

2、主要仪器设备

1.高效液相色谱仪，上海仪电分析仪器

2.恒温水浴锅

3、试剂

1.乙腈：色谱纯

2.正己烷：分析纯 

3.盐酸一氯化钠溶液：称取2g氯化钠于100mL容量瓶中，用少量水溶解，加6mL 37%盐酸，加水至刻度。

4.磷酸氢二钠溶液：称取18g Na2HPO4·12H2O,加水溶解并定容至100 mL

5.衍生剂：称取经过纯化处理的2，4-二硝基苯肼(DNPH)200 mg，用乙腈溶解并定容至100 mL。

6.甲醛标准使用液：准确量取一定量经标定的甲醛标准储备液，配置成2μg/mL的甲醛标准使用液，此标准使用液必须使用当天配制。

4、操作步骤

4.1标准工作曲线绘制

准确量取0.00 mL、0.25 mL、0.50 mL、1.00 mL、2.00 mL、4.00 mL甲醛标准使用液于25 mL比色管中（相当于0.0μg、0.5μg、1.0μg、2.0μg、4.0μg、8.0μg甲醛），分别加入2mL盐酸-氯化钠溶液、1mL磷酸氢二钠溶液、0.5 mL衍生剂，补加水至10 mL，盖上塞子，摇匀。置于50℃水浴中加热40 min后，取出冷却至室温。准确加入5.0 mL正己烷，将比色管横置，水平方向轻轻振摇3-5次后，再将比色管倾斜放置，增加正己烷与水溶液的接触面积。在一个小时内，每隔5 min轻轻振摇3-5次，然后再静置30 min，取20μL正己烷萃取液进样。以所取甲醛标准使用液中甲醛的质量（以微克为单位）为横坐标，甲醛衍生物苯腙的峰面积为纵坐标，绘制标准工作曲线。

4.2样品制备

精确称取小麦粉、大米粉样品约5g于150mL具塞三角瓶中，加入50mL盐酸-氯化钠溶液，振荡提取40min。对于小麦粉或大米粉制品，称取20g于组织捣碎机中，加200mL盐酸-氯化钠溶液，2000r/min捣碎5 min，转入250mL具塞三角瓶中，置于振荡机上振荡提取40 min。将提取液倒入20 mL离心管中，于10000r/min离心15 min，上清液备用。

取2.0 mL样品处理所得上清液于25mL.比色管中，加入l mL磷酸氢二钠溶液、0.5 mL衍生剂，补加水至10 mL，盖上塞子，摇匀。以下操作与标准使用液处理方法一致。最后取20uL正己烷萃取液进样。

4.3高效液相色谱仪参考条件

色谱柱：C18 4.6 mm(i.d)×250mm；

流动相：乙腈+水(70+30)

流速：1 mL/min；

柱温：室温

波长：355 nm；

测定：取相同体积试样制备液和标准使用液分别注入高效液相色谱仪，根据保留时间按定性，外标峰面积法定量。

4.4结果计算

样品中甲醛次硫酸氢钠含量（以甲醛计）按式(1)计算：

c =

式中：

C—样品中甲醛含量，单位为微克每克(μg/g)；

m₁—按甲醛衍生物苯腙峰面积，从标准工作曲线查得甲醛的质量，单位为微克(μg)；

50—样品加提取液体积，单位为毫升(mL)；

2—测定用样品提取液体积，单位为毫升(mL)；

m—样品质量，单位为克(g)。

甲醛含量计算结果不超过10μg/g时，报告结果为未检出。

备注：

参考色谱图：

甲醛加标量为2.0 μg