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【介绍】 Biolistic PDS–1000/He 基因枪系统主单元。主转化室(右)包括微粒发射装配和轰击氦压力计(上)。中央测量计(左)监控转化室内的真空状态,下面两个旋钮用于调节真空流和排气速率。 Biolistic PDS–1000/He 基因枪系统将微米大小的、包被有核酸的金或钨微粒加速到所需要的速度,从而将基因导入细胞、组织或器官。这一过程既不依赖也不作用于细胞表面。系统利用高压氦气的轰击,来推动携带有微粒的塑料大颗粒载体盘朝目标细胞方向加速。推进大颗粒载体的氦气压力由所使用的不同破裂盘决定。破裂盘是一种可在特定压力下破裂的塑料密封体。终止屏可阻止大颗粒载体,使微粒可以通过和转染靶细胞。为了提高这一进程的效率,可抽空转化室,使压力低于大气压力,从而当微粒打向靶细胞时可减少其摩擦阻力。 Biolistic PDS–1000/He 系统能提供: * 一种可重复的、转化完整培养细胞的方法,几乎无需对细胞进行处理 * 用其它方法不能完成的,有特殊生长需要的细胞转化 * 实验过程的zei大控制 * 高重复性 轰击参数* 细胞类型 真空 (inches Hg) 目标间距 (cm) 氦气压力 (psi) 颗粒大小 细菌 29 6 1,100 M5 钨 酵母菌 28 6 1,300 0.6 µm 金 藻类 29 6 1,300 0.6 µm 金 植物 胚芽 28 6 1,300 1.0 µm 金 愈伤组织或愈伤组织或 28 9 1,100 1.0 µm 金 细胞器 28 6 1,300 0.6 µm 金 动物 组织培养 15 3 1,100 1.6 µm 金 组织切片 25 9 1,100 1.6 µm 金 * 我们推荐这些设定作为多种细胞类型的起始轰击参数。许多因素会影响轰击效率,但对于多数用户来说,分别优化主要变量再小幅调整以测试它们的相互影响,就足以获得满意的结果。 PDS–1000/He Hepta 适配器 PDS–1000/He 基因枪系统加上Hepta 适配器后,可以比标准系统多转化7–10 倍的细胞。它配接PDS– 1000/He 系统的冲击室,将氦气冲击波分导至7 个大颗粒载体处。这样,通过在更大面积上均一地分散DNA 包被的金粉或钨粉,增加了这个系统一次轰击的细胞数。当氦气被分成7 道时,降低了压力和颗粒速度,该系统特别适合不太需要强大穿透力的植物和培养细胞。
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