飞行时间质谱系统快速检测肺炎支原体及耐药基因

肺炎支原体（mycoplasma pneumoniae,MP）是引起原发性非典型肺炎等呼吸道感染性疾病的常见病原体。其主要通过呼吸道传播，以婴幼儿和青少年发病居多，一般为散发或小流行，一年四季均可发病，流行趋势为每3-7年在全球流行。因此，开展及时、快速、准确的MP诊断显得尤其重要。16S rRNA是所有原核生物蛋白质合成必需的核糖体RNA，同时具有高度稳定的可变区和保守区，可根据保守区设计通用引物，也可根据可变区设计特异性引物和探针，进行临床检测。

MP缺乏细胞壁结构，使其对影响细胞壁合成的β-内酰胺类、糖肽类和磺胺类等药物天然耐药，因此一般首选大环内酯类药物。随着大环内酯类药物在临床上的广泛应用，临床遇到越来越多的大环内酯类抗生素治疗无效的病例，而基因点突变导致的靶点改变是MP对大环内酯类耐药的最重要原因。针对大环内酯类耐药MP 主要集中在23 rRNA基因的V区和II区、核糖体蛋白L4和L22，具体表现为23 rRNA基因V区的A2063G、A2063C和A2064G，23 rRNA基因II区的G759A，核糖体蛋白L4的C58A、T66G、G81T、A140C、A209T 、C162A 和 A430G以及核糖体蛋白L22的C62A、T65A、T279C 和T508C等。

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）主要用于分析包括蛋白质及核酸在内的生物大分子，该技术应用于核酸检测具有高通量、高灵敏、高准确率的特点。其主要工作原理是结合延伸分析法和碱基特异裂解分析法，将扩增后的核酸产物通过离子源使样品离子化，产生不同质荷比的离子，再经过质量分析器测定该样品中不同种类离子的分子量，按照从小到大的顺序依次排列从而得到一幅质量图谱，并根据检测项目不同给出相应的检测报告。

MALDI-TOF MS检测肺炎支原体及耐药基因方法为通过特定引物扩增目标基因片段，再通过靶向位点探针特异性单碱基延伸，然后通过质谱技术检测延伸位点的碱基，判断耐药基因及突变类型。该方法灵敏度高、操作简单、成本低廉、人员需求低、通量高，可实现6小时384样本出报告，以后每1小时出384份样品报告。MALDI-TOF MS技术基于其检测原理，在大样本多基因突变检测方面的优势将日渐突出。随着人们对该技术的认知度的日渐加深，未来该技术在核酸检测方向的应用将出现更多的思路和方法，MALDI-TOF MS在临床应用领域中将会发挥更大的作用。

 图1 全自动微生物质谱检测系统       

 图2 飞行时间质谱系统检测肺炎支原体及耐药基因流程

参考文献

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