多重 PCR 在病原微生物分子分型中的应用

多重 PCR，又称多重引物 PCR 或复合 PCR，是指在同一 PCR 反应体系里加上二对以上引物，同时扩增出多个核酸片段的 PCR 反应。多重 PCR 技术主要应用于直接检测简单处理过的临床标本, 以达到快速检测的目的。其在基因敲除分析、突变和多态性分析、定量分析等方面都显示出了广泛的应用价值。本文主要介绍多重 PCR 技术在病原微生物检测方面的突出贡献。

主要特点及优势：

• 操作简单，检测周期短

• 灵敏度高，特异性强

• 检测过程系统，全面

• 检测成本低

多重 PCR 目前主要应用于病原微生物检测的两个方面：

1. 检测同一样本中是否有多重病原微生物的出现，一般会选择病原的毒力因子、特异性基因或核糖体 RNA 作为靶基因进行鉴定；

2. 对某一病原的多个基因进行检测以减少假阳性。比如肝炎病毒，肠道致病性细菌，性传播疾病，呼吸道致病菌，战伤细菌及生物战剂细菌的检测，都可以使用多重 PCR 的方法。

多重 PCR 过程结束后，大部分研究者会使用水平凝胶电泳进行鉴定。普通水平凝胶电泳分辨率差，在 PCR 产物较多时不能很好的区分开所有条带，灵敏度低，且当片段浓度较低时，水平凝胶电泳不能很好的将结果展现出来。水平凝胶电泳的另一大缺陷就是，在结果分析中主观臆断性较大，在临床检测或科研过程中缺乏科学应用的严谨性和准确性，所以高分辨率高灵敏度的全自动毛细管电泳系统又因其自动化标准化的特点开始逐步取代水平凝胶电泳。

全自动毛细管电泳系统具有高分辨率、高灵敏度的特点，市面上目前应用广泛的 Qsep 系列全自动核酸蛋白分析系统就是典型的代表。Qsep 系列产品在 500bp 以内可以达到 1-4bp 的分辨率，浓度检测下限可达到 5pg。灵活的通量允许任意数量（1-96）样本全自动上样，在得到美观、精确的实验结果之余，也不会浪费您的试剂和耗材，极大的节约了实验室经费，解放了实验室劳动力。目前 Qsep 系列有 Qsep1、Qsep100、Qsep400、Qsep100 Advance 四种型号，适用于不同样本量的客户。


图 1. 多重 PCR 检测结果


图 2. Qsep1 生物片段分析仪


图 3. Qsep100 全自动核酸蛋白分析系统


图 4. Qsep400 高通量生物片段分析仪