RP-HPLC-MS 方法分析几种蛋白的 胰蛋白酶酶解多肽产物的条件优化

在生物体内，蛋白的翻译后修饰过程是蛋白发挥各种不 同生化功能的基础，这些翻译后修饰包括糖基化、氧化、 甲基化和磷酸化等。作为生物药物的蛋白在生产、运输、 保存过程中会产生变体，从而影响到药物的活性和稳定 性。因此蛋白的肽谱经常被用来研究蛋白的翻译后修饰 过程以及蛋白变体的存在。同时也用于生物制药行业蛋 白产品初级结构的确认 [1-3] ，从而更好地控制生化药品的 质量和确保病人的用药安全。 本文采用胰蛋白酶酶解蛋白的方法，得到各种蛋白的肽 谱，比较几款不同的反相色谱柱在分离蛋白酶解片断时 的差异，同时借助质谱，评价蛋白酶解产物 - 多肽在酸性 或者碱性流动相条件下表现出分离性能的差异。 仪器配置 Thermo Ultimate 3000 系统：泵：DGP-3600RS；自动进样器： WPS-3000TRS；柱温箱：TCC-3000RS；检测器：DAD-3000RS 质谱：TSQ Vantage 色谱软件：Chromeleon 6.8 测试条件 与紫外检测器兼容的液相色谱条件 色谱柱： 1- Acclaim 120 C18, 3mm×150mm, 3µm (P/N063691, S/N001119)； 2-Acclaim 120 C8, 2.1mm×100mm, 3µm (P/N059123, S/N001337)； 3-Hypersil GOLD C4, 2.1mm×150mm, 1.9µm (S/ N1008512×7, LOT10603)； 流动相： 95% 超纯水 +5% 乙腈 +0.1%TFA：5% 超纯水 +95% 乙腈 +0.08%TFA, 梯度洗脱：