徕卡课堂 | 药学研究哪家强，徕卡切割帮您忙

在胰腺癌中，85%的病人诊断后处在恶性程度很高的阶段，主要的特征是浸润近端的淋巴结和血管结构，也伴随转移到肝和腹膜。吉西他滨作为首选药能够产生一些临床效果，但是也仅能起到有限的控制病情，只有小于15%的病人在诊断后6个月中病情不在进一步恶化。尽管与其他辅助化学药如卡培他滨、厄洛替尼等四药联合治疗，也收效甚微。根据CONKO-001和ESPAC-3的试验，吉西他滨在佐剂的辅助下也能增加病人的存活率。但是，最有效佐剂的化学疗法尚不清楚。肿瘤切除病人的5年存活率依然徘徊在10%和20%之间。

因此，鉴定在胰腺癌中影响吉西他滨药效的因子就变得非常重要，这不仅可以最大化治疗效果，还可以避免无用的治疗手段。在吉西他滨治疗的病人当中，药理学研究表明表达DNA修复酶或多肽与核苷酸转运蛋白之间存在相关性。然而，在预后的病人当中潜伏的生物标志的基因型或表达水平非常少。

全基因组分析表明，PDAC是由于一些基因突变引起，这些基因通过核心信号通路中的一些小的序列发挥功能。这不仅可以帮助我们探索发病机制，而且提示我们药物靶向治疗的结点就在基因的表达调控之中。

最近，MicroRNA（miRNA）作为一种对基因有负面调节作用的因子对基因调控有重要作用，它主要是通过压制或直接裂解mRNA发挥功能。MicroRNA可以控制增殖、分化和凋亡，一些microRNA基因位点的易位或缺失以及异常的表达常见于很多肿瘤中，它们可以作为肿瘤压制基因和癌基因。此外，一些特定的microRNA可能会影响化学疗法的治疗。

表达谱鉴定了4种microRNA在PDAC中有异常，它们是miR-155、miR-21、miR-221、和miR-222。其中miR-21在PDAC中表达增加。miR-21与卵巢癌的发生具有相关性，它还被认为在很多实体瘤中起到中枢的作用，比如胶质瘤、胆管上皮癌、乳腺癌等。miR-21这种致癌的特性进一步的被功能性研究所支持，如果抑制miR-21的表达，可以减少很多癌细胞的增殖，如乳腺癌、肝癌和PDAC。相反，如果转染miR-21的前体，就会刺激侵入、渗出和转移，如神经胶质瘤、结肠癌、乳腺癌以及PDAC。

这些数据都提示miR-21可能与癌症的进展有关，因为它是最容易检测出的而且也是数量最多的MicroRNA之一。一些研究把它当做预后的生物标志。原位杂交的结果表明，miR-21的过表达定位于PDAC细胞中，预示着更短的存活率。但是，25位病人的大块肿瘤组织的PCR结果显示，miR-21与临床病理结果并无相关性，与化学治疗也无相关性。因此，我们进一步需要做的是使用激光显微切割技术（LMD）排除间质的影响，避免样品的污染。

最近，也有研究报道miR-21与抵抗抗癌药物存在相关性。尤其是在胆管上皮癌和PDAC中抑制miR-21可以增加癌细胞对吉西他滨的敏感性。这篇文章主要的目的就是miR-21在PDAC各种类型组织细胞中的表达，以及与临床结果和吉西他滨药效之间的关系。

选取了81位PDAC病人，制备冰冻切片，使用LMD获取组织，精确提取5000个细胞用于提取RNA，用于后期的qPCR分析，鉴定miR-21的拷贝数。LMD还提取了5个健康人的胰腺导管。

从结果A中我们能够看到，miR-21在PDAC中比在正常的胰腺导管中有非常高的表达量。激光切割的样品较与非切割样品表达量也提高很多，这充分说明样品纯化对于结果准确的重要性（红色箭头所指）。

从这个表里我们能够看到，miR-21的表达量低于中值时，存活率（OS）为11.2%，高于中值时，存活率（OS）为6.7%，这也说明miR-21与病人的预后结果存在相关性。

从BC的结果可以看出，吉西他滨IC50的量随着miR-21表达量更加而增加。说明miR-21会抑制吉西他滨的诱导肿瘤细胞凋亡的作用，造成很差的临床预后。

研究结果表明miR-21与临床治疗结果以及吉西他滨的药效具有相关性。之前研究的PCR结果并未得到这样的数据，原因在于使用的是整块的肿瘤组织。因为整块的肿瘤组织是一个混杂的成分，既有间质也有导管，还具有正常的组织，造成了结果的不准确性。所以样品的纯度对于我们后期的分析结果非常的重要。

激光显微切割技术是一种在细胞或亚细胞水平上，通过形态学，利用高能的激光束获取单一细胞类型样品的技术，该技术成功地解决了大块分离组织中的细胞功能异质性问题，大大提高了我们分子生物学后期结果分析的准确性。

徕卡作为显微镜生产和研发的世家及领导者，为广大用户提供优质的产品。徕卡推出了两款型号的激光显微切割系统：LMD6和LMD7。两款型号的区别在于所配备的激光器不同。LMD6配备固定频率的高能激光器，主要适合常规病理切片和一些相对较薄的植物或其它组织的切片。LMD7配备了一款功率更高、频率可调的高能固体激光器，它可以通过调节频率来改变激光的脉冲能量来适合不同样品。LMD7对样品的兼容性非常好，适合各种类型的样品包括组织切片、植物切片、涂片、活细胞等样品。

徕卡激光显微切割的最大特点是采用独家专利的激光扫描式切割，重力一步法收集。扫描式切割是在切割过程中，高能激光束快速、精准的切割样品，区别于物台移动方式切割。重力一步法收集是最温和和最高效的收集方式，完成切割即完成收集，提高实验速度。

Elisa Giovannetti et al. MicroRNA-21 in Pancreatic Cancer: Correlation with Clinical Outcome and Pharmacologic Aspects Underlying Its Role in the Modulation of Gemcitabine Activity. Cancer Res; 70(11) June 1, 2010