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高效液相色谱法检测去氧氟尿苷注射液有关物质

发布时间: 2010-08-23 11:10 来源:上海禾工科学仪器有限公司
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操作简便、快速,1本试验采用液相色谱法测定去氧氟尿苷注射液中的有关物质。测定结果准确可靠,从而能有效地控制该药的质量。2流动相的选择上笔者比较了甲醇-水系统、乙腈-水系统、甲醇-磷酸盐缓冲液系统、乙腈-磷酸盐缓冲液系统等,发现去氧氟尿苷与有关物质不能很好地分离,且色谱图中主成分峰有明显的脱尾现象,方法不合理。后来试加入醋酸缓冲液,结果能使去氧氟尿苷与有关物质达到良好的分离,并消除了主峰脱尾现象。3主药的稀释溶剂选择上,考虑到去氧氟尿苷易溶于水,笔者比拟了用流动相和水作为溶剂进行了检测,发现两种供试样品的色谱图中,主峰与有关物质都能达到很好的分离,且检测结果无明显差异。为方便操作和节约成本,笔者选用纯化水作为稀释溶剂。

流速1.0ml/min检测波长269nm进样量20μl结果在该色谱条件下,摘要】目的建立高效液相色谱检测去氧氟尿苷注射液有关物质的方法。方法采用CromasilC18色谱柱(4.6mm150mm5μm以水-乙腈-醋酸缓冲液(pH6.1即取醋酸钠10.92g加水100ml用冰醋酸调至pH6.158320.5为流动相。去氧氟尿苷注射液在5.3535.22μg/ml浓度范围内呈良好的线性关系(r=0.9999n=5结论本法灵敏、准确、简便,可作为去氧氟尿苷注射液有关物质的检测方法。

关键词】去氧氟尿苷;注射液;有关物质;高效液相色谱法

肿瘤组织内受嘧啶核苷磷酸化酶的作用转化为游离的5-氟尿嘧啶而显示抗肿瘤作用。由于这种酶的活性在肿瘤组织内较正常组织为高, 去氧氟尿苷(Deoxifluridin为5-氟尿嘧啶的衍生物。且专一性强,故本品在肿瘤内转化速度快、浓度高,对肿瘤具有较高的选择作用。临床用于胃癌、大肠癌、乳腺癌、子宫颈癌、膀胱癌。去氧氟尿苷疗效高,毒性小,一个具有特色的国际公认的较好的抗癌药。本研究采用HPLC法,建立了去氧氟尿苷注射液中有关物质的测定方法。

1仪器与试药

自动进样器,Agilent1100高效液相色谱仪(四元泵。紫外检测器,惠普色谱工作站,真空脱气机)美国安捷伦公司)去氧氟尿苷对照品(江苏省药品检验所标定)含量99.6%供试品(自制,批号:060114060115060116甲醇(色谱纯)其余试剂为分析纯,水为超纯水

2方法与结果

去氧氟尿苷的保管时间约为4.3min理论板数不低于1000去氧氟尿苷与相邻物质峰的分离度大于1.52.1色谱条件色谱柱:DiamonsilC18液相色谱柱(4.6mm150mm5μm流动相:水-乙腈-醋酸缓冲液(pH6.1即取醋酸钠10.92g加水100ml用冰醋酸调至pH6.158320.5流速:1.0ml/min检测波长:269nm进样量:20μl柱温:25℃。上述色谱条件下。

用水稀释制成约含去氧氟尿苷0.1mg/ml供试品溶液,2.2专属性试验精密量取去氧氟尿苷注射液适量。进样20μl记录色谱图。另精密称取去氧氟尿苷对照品适量,用水溶解并稀释制成浓度为0.1mg/ml对照品溶液,进样20μl记录色谱图。取空白溶剂水及流动相直接进样20μl记录色谱图。由色谱图可见,溶剂对去氧氟尿苷测定无干扰。

加水适量,2.3有关物质线性关系试验精密称取于105℃干燥至恒重的去氧氟尿苷对照品约50mg于50ml量瓶中。振摇使溶解并稀释至刻度,摇匀。精密量取上述溶液1.0ml1.0ml1.0ml1.0ml05ml依次置于25ml50ml100ml200ml200ml量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀。精密量取各浓度溶液20μl注入液相色谱仪,记录峰面积(A以峰面积A对浓度C进行线性回归,得回归方程为A=34581C+518.17r=0.9999n=5线性范围为53535.22μg/ml

稀释至约4μg/ml进样20μl测定色谱系统基线。按信噪比为3测得去氧氟尿苷检测限为36ng/ml2.4最低检测限取“线性关系”项下的对照品溶液。

精密称定,2.5精密度试验取去氧氟尿苷对照品适量。加水溶解并稀释至约0.1mg/ml溶液,进样20μl重复进样6次,记录色谱图,结果峰面积的RSD为0.46%标明该溶液进样精密度良好。

于室温下放置0246810和12h后,2.6稳定性试验取上述精密度试验项下的样品溶液。分别进样20μl峰面积的RSD为0.53%标明该溶液12h内稳定。

按处方比例加水制成80%100%120%共3种浓度的溶液,2.7回收率的测定精密称取去氧氟尿苷对照品适量。按上述色谱条件测定。以加入量与测得量的比值,计算回收率。结果低、中、高3种浓度溶液的回收率分别为99.8%100.1%99.6%RSD分别为0.56%0.48%0.62%平均回收率(n=9为99.8%

加水稀释至刻度,2.8去氧氟尿苷注射液中有关物质的检测精密量取去氧氟尿苷注射液适量(约相当于主药25mg置于250ml量瓶中。摇匀,作为供试溶液;精密量取供试溶液1ml置于100ml量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀,作为对照溶液。取对照溶液20μl注入液相色谱仪,调节检测灵敏度,使主成分色谱峰的峰高为满量程的10%25%另精密量取上述两种溶液各20μl分别注入液相色谱仪,记录色谱图至主成分峰保留时间的2倍。供试品溶液色谱图中如有杂质峰,量取各杂质峰峰面积之和,不得大于对照溶液主峰面积1.0%

 

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