复方益肝灵片中水飞蓟宾的高效液相色谱分析

【摘要】 目的建立复方益肝灵片中水飞蓟宾的含量测定方法。方法采用高效液相色谱法，ODS C18（4.6 mm×250 mm，5 μm），以甲醇-水-冰醋酸（48∶52∶1）为流动相，流速1.0 ml·min-1，检测波长287 nm。结果水飞蓟宾在13.75～110.00 μg·ml-1的进样浓度范围内与其峰面积呈良好的线性关系（r=0.999 8），平均回收率为97.10%（RSD=0.63%，n=6）。结论该方法操作简便、结果可靠，重复性好，可用于复方益肝灵片中水飞蓟宾的分析。

　　【关键词】  高效液相色谱 复方益肝灵片 水飞蓟宾

　　Abstract:ObjectiveTo develop a method for determining thecontent of Silymarin in Fufang Yiganling tablets. MethodsHPLCanalysis was carried out at the following conditions: Cromasil C18column(4.6 mm×250 mm,5 μm), mobile phase:Methanol-Water-Aceticacid(48∶52∶1),the detection wavelength was at 287 nm the flow ratewas 1.0 ml·min-1. ResultsThe standard curve was linear over therange of 5.9～29.5 μg·ml-1 (r=0.999 8),and the average recovery was97.10% with RSD of 0.63%(n=6); ConclusionThis method issimple,reliable and reproducible,it can be used for thequantitative determination of the content of Silymarin in FufangYiganling tablets.

　　Key words:HPLC;   Fufang Yiganlingtablets;   Silymarin

　　复方益肝灵片具有益肝滋肾，解毒祛湿的功效。全方由水飞蓟素、五仁醇浸膏组成，临床用于肝肾阴虚，湿毒未清引起胁痛、纳差、腹胀、腰酸乏力、尿黄等症；或慢性肝炎转氨酶增高者。其主要组成药物水飞蓟素为菊科植物水飞蓟Silybummarianum(L.)Gaertn.的果实，经提取精制所得的松散粉末，主要含黄酮醇类成分，其中水飞蓟宾具有最强的活性，并且很大程度上是水飞蓟素所具有的特性的原因，具有清热解毒、舒肝利胆之功。该品种没有药典标准，部颁标准中的含量测定方法专属性不强，精确度也不够高。《中国药典》2005版Ⅰ部已载有水飞蓟宾的含量测定方法，因此，建立高效液相色谱法测定复方益肝灵片中君药的指征成分水飞蓟宾的含量就尤为必要。本实验采用HPLC法测定复方益肝灵片中水飞蓟宾的含量，以期能较全面有效地控制该制剂的质量。

　　1  仪器与材料

　　岛津LC-10ATVP泵，SPD-10AVP紫外检测器；水飞蓟宾对照品（0856-200203，中国药品生物制品检定所）；复方益肝灵片由吉林敖东洮南药业股份有限公司生产；超纯水；甲醇为色谱纯；冰醋酸为分析纯。

　　2  方法与结果

　　2.1  色谱条件液相色谱柱为ODSC18（SHIMADZU，4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相为甲醇-水-冰醋酸（48∶52∶1）；检测波长287nm；流速1.0 ml·min-1；柱温35℃。

　　2.2  对照品溶液的制备精密称取水飞蓟宾对照品适量，加甲醇制成每毫升含水飞蓟宾0.05 mg的溶液，即得。

　　2.3  供试品溶液的制备取本品5片，除去糖衣，精密称定，研细（过100目筛），取0.5 g，精密称定，置150ml具塞锥形瓶中，加石油醚（60～90℃）50 ml，置90℃水浴上加热回流1 h，放冷，倾出石油醚，用干燥滤纸过滤，再用石油醚40ml，分次洗涤容器内残渣及滤纸，滤过，挥干溶剂后，将滤纸放入原锥形瓶中，精密加甲醇50 ml，称定重量，置水浴上加热回流1h，放冷，称重，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液1 ml，置10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

　　2.4  线性关系考察精密称取水飞蓟宾对照品13.75 mg，置50ml量瓶，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀。再分别精密吸取0.5，1.0，2.0，3.0，4.0 ml到10ml容量瓶，加甲醇稀释至刻度，摇匀。再分别精密吸取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图。以进样浓度为横坐标，以水飞蓟宾和异水飞蓟宾的峰面积和为纵坐标进行线性回归，得回归方程为：Y =1017.40+10 376.02X, r=0.999 8。表明水飞蓟宾在13.75～110.00μg·ml-1的进样浓度范围内，与峰面积线性关系良好。线性回归曲线见图1。

　　2.5 阴性样品干扰考察取水飞蓟宾对照品、复方益肝灵片供试品溶液、不含水飞蓟素的空白溶液，依法进样测定，结果在水飞蓟宾保留时间处无干扰峰影响。

　　2.6   精密度实验精密吸取供试品溶液20μl，重复进样6次，记录色谱图，结果RSD为0.24%（n=6）。

　　2.7  稳定性实验取精密度项下的供试品溶液，在0，2，4，8 h 先后吸取20μl注入液相色谱仪，进行稳定性考察，结果RSD为0.60%。

　　2.8  重现性实验取同一批样品，按正文方法制备5份供试品溶液，在相同色谱条件下进行实验，结果RSD为0.33%。

　　2.9  加样回收率实验精密称取6份已知含量的样品粉末各0.25 g,加入等量的水飞蓟宾对照品，按样品含量测定项下的方法操作，记录色谱图，计算加样回收率。结果见表1。其平均回收率为97.10%，RSD为0.63%（n=6）。表1 回收率实验结果（略）

　　2.10  样品含量测定取3批样品各0.5 g，精密称定，依法制成供试品溶液，均以20μl进样，分别测定吸收峰面积，以外标法计算水飞蓟宾含量。结果见表2。表2  样品含量测定结果（略）

　　3  讨论

　　曾选用不同溶剂系统作为流动相进行实验，如：甲醇-水-冰醋酸（50∶50∶0.5）、乙腈-甲醇-水-冰醋酸（5∶45∶50∶0.5）、甲醇-水-冰醋酸（48∶52∶1）等［1］溶剂系统，结果甲醇-水-冰醋酸（48∶52∶1）分离效果最好。根据水飞蓟宾的紫外吸收光谱特征，水飞蓟宾在287nm处有最大吸收，选择287 nm作为检测波长。

　　本研究建立的复方益肝灵片中水飞蓟宾含量的测定方法可为复方益肝灵片标准的进一步完善提供依据。

　　【参考文献】
　　［1］国家药典委员会.中国药典,一部［S］.北京：化学工业出版社，2005：56.